Сериал "Одна ночь" знакомит зрителей с двумя главными героинями - Марией и Ириной. Хотя они одного возраста и обладают внешней схожестью, их характеры абсолютно различны. Но несмотря на это, их дружба укрепилась еще в школьные годы. Их близость и сплоченность поражает всех, кто их знает. Мария предпочитает тишину и уединение, ей нравится работа с растениями и цветами, поэтому она выбрала профессию флориста. Ирина, напротив, обожает веселиться, общаться с людьми и проводить время на вечеринках, поэтому ее место - официантка в кафе.
Но несмотря на доброту, красоту и ум, ни Ира, ни Маша не могут найти свое счастье в личной жизни. Мария неоднократно пыталась наладить романтические отношения, но каждый раз что-то шло не так. После каждой ночи с парнем, все заканчивалось, и они переставали видеться. Ирина живет с парнем по имени Толик, но последние годы он стал алкоголиком и часто устраивает скандалы. Их жизни наполнились страданиями и разочарованиями, а слово "любовь" начало ассоциироваться лишь с болями.
Однажды судьба решила испытать девушек еще сильнее. Когда Толик снова начал избивать Ирину, Маша вступила в защиту подруги и нечаянно стала причиной его смерти. Расследование этого убийства возложено на следователя Алексея Прокофьева. И хотя у него есть все основания подозревать Ирину, он не может оставить в стороне чувства, которые испытывает к ней. В это время Маша страдает от вины и старается помочь матери Толика. В ходе этой помощи она встречает Николая, архитектора, и между ними вспыхивает страстный роман.
Однако Маша не может дать волю своим чувствам из-за страха, что их отношения обрывутся после одной ночи, так же, как и все предыдущие. Таким образом, ее сердце разрывается между любовью к Николаю и желанием защитить его от непредсказуемого будущего, связанного с ней.